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AM-38細(xì)胞,AM-38細(xì)胞株的復(fù)蘇方法

2017-02-09 瀏覽次數(shù):1787

AM-38細(xì)胞,AM-38細(xì)胞株的復(fù)蘇方法

產(chǎn)品名稱(chēng):AM-38細(xì)胞

中文名稱(chēng):星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞

貨號(hào):AM-38

規(guī)格:1~3*106細(xì)胞/25cm2培養(yǎng)瓶

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一、細(xì)胞復(fù)蘇的原則

在實(shí)際操作中,凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇,再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。

二、細(xì)胞復(fù)蘇的主要操作步驟

(1)佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。

(2)迅速放入 38℃水浴中,并不時(shí)搖動(dòng),在1分鐘內(nèi)使其*融化,然后在無(wú)菌下取出細(xì)胞。

(3)在1000r/min速度下離心5~10分鐘,棄去上層液,加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度1×109/L,置37℃溫箱靜置培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀(guān)察生長(zhǎng)情況。若細(xì)胞密度較高,及時(shí)傳代。或無(wú)需離心直接將細(xì)胞加入瓶中,并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)12~24小時(shí)后,充去上清,換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

三、注意事項(xiàng)

在細(xì)胞復(fù)蘇操作時(shí),應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快,可不時(shí)搖動(dòng)安瓿或冷凍管,使之盡快通過(guò)zui易受損的溫度段(-5~0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高,生長(zhǎng)及形態(tài)良好。然而,由于凍存的細(xì)胞還受其他因素的影響,有時(shí)也會(huì)有部分細(xì)胞死亡。此時(shí),可將不貼壁、飄浮在培養(yǎng)液上(已死亡)的細(xì)胞輕輕倒掉,再補(bǔ)以適量的新培養(yǎng)液,也會(huì)獲得較為滿(mǎn)意的結(jié)果。

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