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技術(shù)文章 / article
HAKATA10099-141胎牛血清的保存與溶解
2017-05-17 瀏覽次數(shù)：1678
血清10099-141血清的溶解與保存
血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被 除去的 血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白 、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。
1、如果不用，先放置-80℃保存。
2、如果要用，可于4℃冰箱放置過(guò)夜，再在室溫溶解。
3、溶解好的血清應(yīng)立即分裝，-80℃保存。
4、保存于-80℃的血清解凍時(shí)應(yīng)先與4℃冰箱放置過(guò)夜再在室溫溶解。切勿直接放在室溫溶解。
細(xì)胞傳代方法
根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的恃點(diǎn)，傳代方法有3種：
1．懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代
離心法傳代：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。
直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時(shí)，將上清培養(yǎng)液去除l／2一2／3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。
2．半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（雜交瘤）
此類細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹
打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來(lái)，進(jìn)行傳代。
3．貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代
采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。
細(xì)胞冷凍保存
細(xì)胞應(yīng)生長(zhǎng)良好，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度為80%左右。
2.注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO質(zhì)量要好，應(yīng)無(wú)菌且無(wú)色。
3.冷凍保存之細(xì)胞濃度：一般成纖維細(xì)胞1~3x106cells/ml，懸浮細(xì)胞5~10x106cells/ml，上皮細(xì)胞2~5x106。
4.凍存液的配方是：60%無(wú)血清培養(yǎng)液30%血清10%DMSO
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